A) PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES MICROBIANAS
1. Adicionar  agua destilada a cada cepa que se va a estudiar cuidado de que quede turbia a manera de suspensión.
2. Colocar 1 ml de jugo de naranja en un tubo de 13 X 100, 1 ml de Agua destilada en otro tubo de 13X100 y 1 ml de puré de tomate en otro tubo de 13 X 100. Será necesario rotularlos.
3. Transferir 1 ml de la suspensión bacteriana preparada a cada tubo

​

B) DETERMINACIÓN DEL PUNTO TERMICO MORTAL (PTM)
1. Colocar en una gradilla una serie de  4  tubos  de 13 X 100 para cada tipo de bacteria a estudiar
2. Marcar cada tubo con el nombre de la cepa que se va a estudiar.
3. Anotar en cada tubo las temperaturas siguientes   testigo, 37•C,    70•C,   y ebullición
4. Colocar en cada tubo 0.5 ml de la suspensión bacteriana que preparaste con agua, jugo de naranja y puré de tomate a tratar
5. Calentar la suspensión a  la temperatura indicada en un baño maría durante 10 minutos (el tubo testigo NO SERA CALENTADO)
6. Vaciar el contenido de cada tubo en la superficie de una placa de Agar nutritivo y
7. Homogeneizar por rotación sobre la mesa o mediante extensión con varilla de vidrio doblada a 90 grados
8. Incubar  a 39ºC durante 24- 48 horas.
9. Observar si hay crecimiento.

C) DETERMINACIÓN DEL TIEMPO TÉRMICO LETAL(TTL)
1. Colocar en una gradilla una serie de 4 tubos de 13 X 100 para cada tipo de bacteria  a estudiar
2. Marcar cada tubo con el nombre de la cepa que se va a estudiar
3. Anotar en cada  tubo los tiempos que se indican a continuación: Testigo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos
4. Colocar en cada tubo 0.5 ml de la suspensión bacteriana que preparaste con agua, jugo de naranja y puré de tomate  a estudiar
5. Calentar en baño maría a 70•C para todos los tubos y respetando  los tiempos indicados ( el tubo testigo NO SE CALIENTA)
6. Vaciar el contenido de cada tubo sobre la superficie de una placa de Agar  nutritivo  y homogeneizar  por rotación sobre la mesa o extensión con varilla de vidrio doblado a 90 grados
7. Incubar las placas a 37•C durante 24- 48 horas
8. Observar si presenta o no crecimiento.