I. Preparación de las muestras:
1. Prender el mechero de alcohol, tomar un asa y calentarlo hasta ver el asa de color rojo, dejarlo por un momento para que se enfría.
2. Poner el asa a 45º en el cultivo (frotis) y proseguir a extraer el cultivo y ponerlo en el portaobjeto.
3. Al finalizar calentar nuevamente el asa para que no nos contaminemos de lo que contiene el cultivo.

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II. Tinción de los frotis:
1. Cubrir todo el frotis con el primer colorante que es el cristal violeta durante unos 3min. Se retirará el colorante mediante un suave lavado con agua, deslizando el agua sobre el portaobjeto, para no desprender la muestra.
2. Ahora cubrir con lugol la muestra durante un minuto, y después se realizará otro suave lavado. Todas las células se teñirán de violeta.
3. Se retirará el colorante con etanol, goteándolo por el portaobjeto, hasta que las gotas que salen no tenga casi color. Las células Gram- pierden el color violeta y quedaran incoloras. Las Gram+ seguirán violetas.
4. Luego, cubrir la preparación con safranina, que es el colorante de contraste, por 2 min. 
5. Realizar otro suave lavado con agua. La safranina solo estará en las bacterias de Gram-, que quedarán rojas y las Gram+ seguirán violetas.
6. Finalmente secar la preparación sobre papel filtro y observar la preparación en el microscopio (utilizando el objetivo de inmersión).